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哺乳動物蛋白表達 哺乳動物蛋白表達
蛋白表達

哺乳動物蛋白表達

  • 基礎研究
  • 治療性研究
  • 最快2周交付

服務介紹

重組蛋白表達在治療和應用領域的需求很高，特別是對于生物技術和制藥公司來說，這是一種治療人類疾病的變革性方法。除了工業用途外，學術研究小組也可以依賴重組蛋白進行功能研究和高分辨率結構確定。

百英生物可提供CHOK1和HEK293的哺乳動物細胞表達服務。哺乳動物蛋白表達通常因其能夠產生復雜蛋白和翻譯后修飾（PTM）能力而被青睞，此外還有抗原制備、抗體發現和結構及功能研究。

除此之外，百英生物也有依據大腸桿菌（E. Coli）的原核蛋白表達系統，E. Coli具有快速培養和易于遺傳操作的優點，并且產生多樣化蛋白類型方面有著良好的表現記錄。百英生物的重組蛋白表達平臺，表達的蛋白產品質量高、表達周期快，同時保證性價比，歡迎咨詢！

哺乳動物蛋白表達介紹

如何在哺乳動物細胞中表達

通過哺乳動物細胞系統技術進行的表達通常始于您所選序列的合成。在構建質粒載體之后，我們將重組載體轉染進CHOK1（中國倉鼠卵巢）細胞或HEK293（人類胚胎腎）細胞中進行蛋白質的表達和純化，并采用嚴格的質量控制措施SDS-PAGE分析，來確認其存在和純度。

如何在E. Coli中表達

通過E. coli進行的表達是一個多步驟的過程，它始于設計并構建一個攜帶所需蛋白質基因序列的質粒。此后，該質粒被轉化入目標宿主工程菌中，然后在受控條件下培養以促進細菌生長并通過誘導劑誘導蛋白表達。達到最佳表達水平后，細菌被裂解以釋放蛋白質，然后使用包括親和層析或離子交換在內的等多種純化方法進行純化。

應用

通過哺乳動物細胞進行的表達是臨床使用的重組蛋白生產系統的首選，數百個生物制藥候選產品正在臨床開發中。

基礎研究

  • 真核蛋白質的合成、加工和分泌信號被哺乳動物細胞正確識別
  • 允許適當的蛋白質折疊、糖基化和翻譯后修飾，這些通常是體外和體內系統完全生物學活性的要求
  • 蛋白質結構、功能和表征研究

治療性開發

  • 單克隆抗體（mAbs）的生產、抗體篩選和抗體庫
  • 適用與細胞系、載體和轉染方法學
  • 重要臨床活性病毒表面抗原的生產
  • 包括免疫學和腫瘤學應用的生物技術研究領域

服務亮點

基礎研究

  • 真核蛋白質的合成、加工和分泌信號被哺乳動物細胞正確識別
  • 允許適當的蛋白質折疊、糖基化和翻譯后修飾，這些通常是體外和體內系統完全生物學活性的要求
  • 蛋白質結構、功能和表征研究

治療性開發

  • 單克隆抗體（mAbs）的生產、抗體篩選和抗體庫
  • 適用與細胞系、載體和轉染方法學
  • 重要臨床活性病毒表面抗原的生產
  • 包括免疫學和腫瘤學應用的生物技術研究領域

快速交付

  • 僅2-3周即可完成哺乳動物細胞系統表達
  • 通過哺乳動物細胞表達是臨床應用的主要重組蛋白生產系統
  • 數百個生物制藥候選產品正在臨床開發中
立即咨詢

服務流程

序列設計與合成

質粒構建和制備

瞬轉表達

親和純化

質量檢測

冷鏈發貨

哺乳動物蛋白表達
服務詳情

Service Step 服務詳情 周期 交付物
基因合成和亞克隆
  • 密碼子優化和基因合成
  • 亞克隆到表達質粒
  • 質粒驗證和大量抽提
 2-3周
  • 純化的蛋白 (SDS-PAGE>90%, Endotoxin<1EU/mg)
  • COA報告
  • SEC-HPLC檢測
100ml小量表達
  • 細胞瞬時轉染
  • 重組蛋白純化
  • QC分析
大規模表達純化(1L-100L)
  • 大規模瞬轉表達
  • 重組蛋白純化
  • QC分析
 2-3周
  • 保證蛋白產量 (SDS-PAGE>90%, Endotoxin<1EU/mg)
  • COA報告
  • SEC-HPLC檢測

案例分享

案例1: PD-L1 (Fc tag), Extracellular domain (Phe19-Thr239) expressed in CHO

SDS-PAGE

R: Reducing condition;

N-R: Non-reducing condition;

M: Marker

Detector A Channel 2 280nm

案例2: CD137 (His tag), Extracellular domain (Leu24-Gln186) expressed in HEK293

recombinant-case2-1

R: reducing condition;
M: Marker

recombinant-case2-2

Human CD137L/mFC; Human CD137/ His;
Recombinant Human CD137/His is captured on Protein A chip, can bind to Human CD137L/mFc.

recombinant-case2-3

Log Human CD137, His tag EC50=4ng/ml
CD137 is immobilized at 2μg/mL (100 μL/well), it can bind to Utomilumab. The concentration for 50% of maximal effect(EC50) of is 4 ng/ml.

recombinant-case2-4

Log Human CD137, His tag EC50=20ng/ml
CD137 is immobilized at 2μg/mL (100 μL/well), it can bind to Human CD137L. The concentration for 50% of maximal effect(EC50) of is 20 ng/ml.

“我們根據客戶的需求量身定制相應的服務，提供使用CHOK1或HEK293細胞進行哺乳動物重組蛋白表達。每個項目的成功交付，都展現了生物技術具備創造的可能性，并最終帶來更多的應用價值。”
Yiyang Ge
葛依陽
百英生物科學家

FAQs

  • 為什么要使用基于哺乳動物的細胞表達？

    使用哺乳動物宿主系統是產生最生理原生的重組蛋白的理想選擇，如果需要的話，可以進行正確的磷酸化或適當折疊，以便在人類中用于治療使用。

  • CHO-K1或HEK293細胞有什么區別？

    根據客戶的需求，百英生物提供CHO-K1和HEK293細胞，使用哺乳動物細胞系統進行表達。 一般情況下，如果客戶需要更高純度的蛋白，我們會建議使用HEK293細胞制備融合蛋白。如果客戶需要高產量的抗體，我們比較推薦使用CHO-K1細胞。

  • 為什么CHO細胞經常用于哺乳動物蛋白表達？

    CHO細胞常用于哺乳動物蛋白表達的原因在于它們具備多項優勢：首先，CHO細胞具有良好的遺傳穩定性，不會發生基因丟失或表達量下降的情況；其次，CHO細胞適合大規模懸浮培養，適應無血清或化學成分的培養基，利于排除培養基中血清蛋白對后期產物純化的干擾；此外，CHO細胞作為表達系統已經非常成熟，得到了藥品監管機構的廣泛接受，且現代基因組編輯技術，如CRISPR/Cas9系統，可以在CHO細胞中進行高效的基因敲除、敲入和定點編輯，進一步增強了CHO細胞在基因操作方面的靈活性。因此，CHO細胞成為了哺乳動物蛋白表達的優選系統，尤其在需要復雜翻譯后修飾的治療性蛋白藥物生產中。 3, 4

參考文獻

  • Malm, M., Kuo, C., Barzadd, M. M., Mebrahtu, A., Wistbacka, N., Razavi, R., Volk, A., Lundqvist, M., Kotol, D., Tegel, H., Hober, S., Edfors, F., Gr?slund, T., Chotteau, V., Field, R., Varley, P. G., Roth, R. G., Lewis, N. E., Hatton, D., . . . Rockberg, J. (2022). Harnessing secretory pathway differences between HEK293 and CHO to rescue production of difficult to express proteins. Metabolic Engineering, 72, 171-187. https://doi.org/10.1016/j.ymben.2022.03.009
  • Haldankar, R., Li, D., Saremi, Z. et al. Serum-free suspensin large-scale transient transfection of CHO cells in WAVE bioreactors. Mol Biotechnol 34, 191–199 (2006). https://doi.org/10.1385/MB:34:2:191
  • Khan, K. H. (2013). Gene Expression in Mammalian Cells and its Applications. Advanced Pharmaceutical Bulletin, 3(2), 257-263. https://doi.org/10.5681/apb.2013.042
  • Gray, D. (1997). Overview of Protein Expression by Mammalian Cells. Current Protocols in Protein Science, 10(1), 591-5918. https://doi.org/10.1002/0471140864.ps0509s10

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